Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1改进型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现家兔自身免疫到经常出现1标准型癌症医学副作用的令人满意百余人在孩童时期就有较好的说明了，多个家兔自身免疫无症状的孩童除此以外70%在肝细胞转换后10年内患病癌症，而随访15年的孩童这一数目增大到84%。正因如此，分之一医学1标准型癌症一半以上的标准型1标准型癌症的肺癌组态还没得不到充分的研究。

愈发多的人开始用于已确定该系统来定义1标准型癌症的令人满意：幼体在经常出现多种家兔自身免疫时离开第1之前，经常出现血压精神状态时离开第2之前，经常出现副作用时离开第3之前。一些多发家兔自身免疫无症状的幼体，在1期和2期，令人满意较快，并发展为肺癌的1标准型癌症。我们以后说明了了一第一组在首次检查到多种家兔自身免疫样本后有数10年无癌症的短时间令人满意者，这第一组病患000人少，但形态非常明确。随后，我们发现家兔自身免疫特异性CD8+T细胞膜底物在令人满意较快的病患中会基本不存在，但在近期肺癌和长期存在的癌症病患中会很易于检查到。这可能暗示，与令人满意病患相比较，这些病患自身免疫底物的调节加强。

早期研究暗示，尽管调节性T细胞膜(Treg)数量但会，但癌症病患存在一些动态有缺陷，其中会除此以外对IL-2的底物能力降低。此外，癌症病患中会的畸变CD4+T细胞膜可能对调节凸显抵抗性，显出为畸变T细胞膜的抑制作用减快，连续性激发的Treg和排泄激发的其会Treg，以及免疫漫长的CD4+T细胞膜中会IL-2底物减快。本研究的借此是说明了了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在一小群极较快令人满意者中会的形态，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方式：BOX研究是一项以人群为基础的纵向研究，在21岁以下确诊的病患直系亲属中会检查1标准型癌症的危险主因。我们以后说明了了长期较快令人满意者的形态，他们保持多重家兔自身免疫无症状超过10年，但没经常出现癌症的医学副作用，快性或非外阴自身免疫。随后，10名继续保持无癌症并主动提供大量肠道样本的较快令人满意者纳入T和B细胞膜动态比对。在目前为止的研究中会，8名快令人满意者(SP第一组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的家兔自身免疫无症状。所有的自发性都处于1标准型癌症令人满意的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身免疫对某些免疫的水痘，然而，一名病患仍未处于2期有数6年，但没经常出现医学副作用，一名病患被病人为癌症，该受测者72岁，在采集检验样本时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中会对该ADP顺利完成了单独分析报告。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜拳法和T细胞膜抑制作用试验分析报告ADP中会Treg的频带、表标准型和动态。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、举例来说和转回)顺利完成无监督聚类比对，分析报告Treg表标准型。

结果：与身心健康ADP相比较，来自快令人满意体的失忆CD4+T细胞膜的监督聚类标示出，诱导的失忆CD4+ Treg频带增大，与止痛药其会的TNFR具体蛋白(GITR)回应增大有关。一名HbA1c消退的病患与令人满意较快者和给定的折衷第一组相比较，Treg对光有所不尽相同。动态比对暗示，与身心健康ADP相比较，来自较快令人满意体的Treg介导的CD4+畸变T细胞膜抑制作用明显损伤。显出为对畸变CD4+T细胞膜CD25和CD134回应的抑制作用增大。

三幅1 深入的表标准型比对标示出，CD4+Treg亚标准型在快令人满意队列中会增大。由FlowSOM生成的Treg室，有数在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标有物回应鉴定出10个元簇:失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用于9个不尽相同Treg标有生成的10个元簇的MST。每个路由器都是一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在路由器第一组附近手工。每个路由器中会的饼三幅回应单个标有的回应高级别。(b)每个元聚类的热三幅，以标示出基本标有回应。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)生成三幅，以及FlowSOM标有的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对于同位素为每个metacluster箱支线三幅(同位素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞膜(l)。黄色圆圈都是人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用于CITRUS的预测模标准型证实，Treg频带的增大是令人满意较快的徽标。PG门控(a - f)和橄榄比对(g-k)比较SP自发性和给定的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞膜上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的都是性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR回应顺利完成分离，模拟器FlowSOM群体。(b) HD(横纹)和SP(蓝点)第一组以及ADPSP 606(黄色)中会CD25+ cd127的频带汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控侄集的箱支线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3回应强度着色，箭头突出的簇被标有为SP和HD队列二者之间的不尽相同。(j)箱支线三幅标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组中会，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相对于同位素(数目)。(k)直方三幅标示出每个簇的表标准型(蓝色)和Treg标有相对于回应与背景回应(金色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中会标有的回应有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与身心健康献血者相比较，令人满意较快者失忆treg的GITR增大。每个失忆CD4+T细胞膜元簇(失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个回应标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的回应热三幅(sp606不除此以外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中会所有HD(红色)、所有SP(金色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR回应结合，标示出直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有ADP除此以外，p< 0.05(金色)ADPSP 606和给定的HD不除此以外在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR回应，从PG门控，从所有HD(红色)、所有SP(金色)和SP 606(黄色)结合，标示出直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自较快令人满意的CD4+ treg细胞膜依靠畸变CD4+T细胞膜的能力降低。SP第一组用金色的支线和圆圈回应，HD第一组用金色的支线和圆圈回应，黄色的支线/圆圈回应ADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标有为CFSE, Treg按仔细观察的数目起始。用抗CD3 /28微珠诱导细胞膜，培养出来3天后顺利完成流式细胞膜拳法检查。(a-d)与CD4+需要的话者相对于应的treg培养出来(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用总和。用于无症状折衷(诱导的响应细胞膜不含treg)数值抑制作用总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 畸变CD4+T细胞膜对较快令人满意的T细胞膜诱导的抑制作用更引人注目。SP第一组用金色的支线和圆圈回应，HD第一组用金色的支线和圆圈回应，黄色的支线/圆圈回应ADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标有，treg按仔细观察的数目起始。用抗CD3 /28微珠诱导细胞膜，培养出来3天后顺利完成流式细胞膜拳法(CD25反染)和细胞膜因侄比对。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用百分百余人(b)。(c,d) CD25抑制作用百分百余人(c)和CD134抑制作用百分百余人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来中会的回应。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自较快令人满意侄的诱导失忆CD4+Treg在GITR回应中会得不到了扩展和丰富，凸显了有利于研究Treg在1标准型癌症后果幼体中会的值得注意的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28