Diabetologia：激活但机制受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现人本体内自身选择性到浮现1型式乳癌临床症状的十分困难率在老年人时期就有愈来愈好的描述，多个人本体内自身选择性乙型肝炎的老年人中所有70%在胰岛素转换后10天内患上乳癌，而随访15年的老年人这一%-上升到84%。比起，占临床1型式乳癌一半以上的型式1型式乳癌的复发机制还没有受益合理的研究工作。

越发多的人开始采用分期系统会来定义1型式乳癌的十分困难：变异在浮现多种人本体内自身选择性时踏入第1前期，浮现血糖异常时踏入第2前期，浮现症状时踏入第3前期。一些多发人本体内自身选择性乙型肝炎的变异，在1期和2期，十分困难较比较慢，并发展为复发的1型式乳癌。我们先前描述了一四组在首次监测到多种人本体内自身选择性抽样后至少10年无乳癌的极比较慢十分困难者，这四组病变人数少，但外观上愈来愈为明确。随后，我们推断出人本体内自身抗原选择性CD8+T细胞核加成在十分困难减比较慢的病变中所基本不存有，但在近期复发和长期存有的乳癌病变中所很容易监测到。这可能指出，与十分困难病变相比，这些病变自身选择性的调控增强。

早期研究工作指出，尽管调控性T细胞核(Treg)数量情况下，但乳癌病变存有一些功能缺陷，其中所除此以外对IL-2的加成战斗能力降低。此外，乳癌病变中所的效应CD4+T细胞核可能对调控愈来愈具抵抗性，表现为效应T细胞核的选择性减弱，连续性显现出的Treg和本体外显现出的诱发Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞核中所IL-2加成减弱。本研究工作的目的是描述了CD4+调控性T细胞核(Treg)在一小群极减比较慢十分困难者中所的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁一般而言确诊的病变亲属中所检查1型式乳癌的危险因素。我们先前描述了长期减比较慢十分困难者的外观上，他们保持一致多重人本体内自身选择性乙型肝炎超过10年，但没有浮现乳癌的临床症状，比较慢性或非受累血栓。随后，10名一直保持一致无乳癌并愿意提供大量肝脏抽样的减比较慢十分困难者设为T和B细胞核功能分析。在目前的研究工作中所，8名比较慢十分困难者(SP四组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的人本体内自身选择性乙型肝炎。所有的旁观者都受制于1型式乳癌十分困难的1期，尽管一些人随后失去了人本体内自身选择性对某些抗原的乙型肝炎加成，然而，一名病变已经受制于2期至少6年，但没有浮现临床症状，一名病变被病患为乳癌，该受试者72岁，在挖掘实验抽样时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中所对该NADPH开展了直接检验。除去外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多模板流式细胞核练成和T细胞核选择性试验车检验NADPH中所Treg的频谱、表现型式和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无监理聚类分析，检验Treg表现型式。

结果：与身本体健康NADPH相比，来自比较慢十分困难本体的无意识CD4+T细胞核的监理聚类看出，应答的无意识CD4+ Treg频谱上升，与阿托品诱发的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来上升有关。一名HbA1c下降的病变与十分困难减比较慢者和匹配的对照四组相比，Treg谱有所相异。功能分析指出，与身本体健康NADPH相比，来自减比较慢十分困难本体的Treg介导的CD4+效应T细胞核选择性相对来说受损。表现为对效应CD4+T细胞核CD25和CD134表达出来的选择性上升。

由此可知1 深入的表现型式分析看出，CD4+Treg亚型式在比较慢十分困难队列中所上升。由FlowSOM作用于的Treg三楼，围住在来自所有NADPH的能活CD4+CD45RA -细胞核上。根据上标物表达出来鉴定出10个元簇:无意识T细胞核_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞核;HLA-DR + GITR +无意识T细胞核;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)采用9个相异Treg上标作用于的10个元簇的MST。每个数据流都有一个战斗群(100个战斗群)，愈来愈大的元战斗群(10个元战斗群)在数据流四组周围上色。每个数据流中所的饼由此可知问到单个上标的表达出来级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以看出整本体上标表达出来。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)作用于由此可知，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说原子量为每个metacluster装示意由此可知(原子量> 0.05%)确定为HD和SP四组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞核(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞核(l)。紫色白点都有慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加小写字母秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 采用CITRUS的预报猜测，Treg频谱的上升是十分困难减比较慢的图标。分级去极化(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞核上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的都有性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR表达出来开展除去，模拟FlowSOM群本体。(b) HD(网纹)和SP(布氏)四组以及NADPHSP 606(紫色)中所CD25+ cd127的频谱汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化三子集的装示意由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度着色，箭头引人注意的簇被比对为SP和HD队列相互间的相异。(j)装示意由此可知看出了在SP(布氏)和HD(灰点)四组中所，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的一般来说原子量(%-)。(k)数据集看出每个簇的表现型式(黄色)和Treg上标一般来说表达出来与背景表达出来(黄色);上列，磁盘Treg_3;下面偷偷地，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中所上标的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加小写字母秩检验

由此可知3 与身本体健康献血者相比，十分困难减比较慢者无意识treg的GITR上升。每个无意识CD4+T细胞核元簇(无意识T细胞核_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞核;HLA-DR + GITR +无意识T细胞核;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个表达出来上标的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出来热由此可知(sp606不除此以外在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表达出来串联，看出数据集(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon相加小写字母秩和检验，p< 0.07(紫色)所有NADPH除此以外，p< 0.05(黄色)NADPHSP 606和匹配的HD不除此以外在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表达出来，从分级去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)串联，看出数据集(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加小写字母秩检验

由此可知4 来自减比较慢十分困难的CD4+ treg细胞核控制效应CD4+T细胞核的战斗能力降低。SP四组用黄色的支线和白点问到，HD四组用白色的支线和白点问到，紫色的支线/白点问到NADPHsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(转发者)被上标为CFSE, Treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠能增殖细胞核，人才培养3同月开展流式细胞核练成监测。(a-d)与CD4+转发者一般来说应的treg人才培养(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性一般而言。采用乙型肝炎对照(应答的号召细胞核不含treg)测算选择性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 效应CD4+T细胞核对减比较慢十分困难的T细胞核能增殖的选择性愈来愈尖锐。SP四组用黄色的支线和白点问到，HD四组用白色的支线和白点问到，紫色的支线/白点问到NADPHsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上标，treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠能增殖细胞核，人才培养3同月开展流式细胞核练成(CD25反染)和细胞核因三子分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性百份(b)。(c,d) CD25选择性百份(c)和CD134选择性百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中所的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自减比较慢十分困难三子的能增殖无意识CD4+Treg在GITR表达出来中所受益了扩展到和丰富，忽视了促使研究工作Treg在1型式乳癌后果变异中所的一般而言的有效性。

中文翻译出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28